pcr中引物的作用

pcr中引物的作用：找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列，一個引物與目的基因一端的一條DNA模板鏈互補，另一個引物與目的基因另一端的另一條DNA模板鏈互補。在PCR（聚合酶鏈式反應）技術中，已知一段目的基因的核苷酸序列，根據這一序列合成引物，利用PCR擴增技術，目的基因DNA受熱變性後解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然後在DNA聚合酶作用下進行延伸，如此重複迴圈，延伸後得到的產物同樣可以和引物結合。

1、擴充套件資料PCR引物設計PCR反應中有兩條引物，即5′端引物和3′引物。

2、設計引物時以一條DNA單鏈為基準（常以資訊鏈為基準），5′端引物與位於待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物與位於待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。

3、引物設計的基本原則：引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。

4、引物鹼基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C 過多易出現非特異條帶。

5、ATGC最好隨機分佈，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。

6、引物內部不應出現互補序列。

7、兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。

8、引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續8個鹼基在待擴增區以外不能有完全互補序列，否則易導致非特異性擴增。

9、引物3‘端的鹼基，特別是最末及倒數第二個鹼基，應嚴格要求配對，最佳選擇是G和C。

10、引物的5′端可以修飾。

11、如附加限制酶位點，引入突變位點，用生物素、熒光物質、地高辛標記，加入其它短序列，包括起始密碼子、終止密碼子等。