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pcr是什麼意思

欄目: 歷史 / 釋出於: / 人氣:1.94W

聚合酶鏈式反應。

聚合酶鏈式反應 (PCR) 是一種基本的分子生物學技術,可準確擴增和量化極低水平的核酸,目前用於多種應用,包括 SNP 鑑定、基因分型、傳染病鑑定、遺傳指紋圖譜、DNA 測序和克隆,以及基因表達。定量 PCR (qPCR) 和逆轉錄 (RT-qPCR) 以及隨後的 qPCR 是檢測和定量目標 DNA 或 RNA 序列的強大方法。

擴增子純化和 PCR 設定,包括主混合物、引物和樣品的費力移液組合,可能成為基因組工作流程中的瓶頸。這些過程的自動化可以消除與手動處理相關的人為錯誤和汙染,同時確保高質量的結果。

測定小型化時,需要搭配PCR封板膜,這樣既降低了 96 孔和 384 孔 qPCR 檢測的成本,並且由先進的反應儀器不需要吸頭或與液體接觸,因此將交叉汙染的風險降至最低。此外,亞微升體積的精確轉移使得無需事先稀釋即可新增濃縮樣品和試劑。藉助為基因組研究量身定製的整合板處理自動化和軟體選項,儀器可以輕鬆擴充套件以適應生產環境

PCR反應中有兩條引物,即5′端引物和3′引物。設計引物時以一條DNA單鏈為基準(常以資訊鏈為基準),5′端引物與位於待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′端引物與位於待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。

pcr是什麼意思

引物長度:15-30bp,常用為20bp左右。

引物鹼基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C 過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分佈,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。

引物內部不應出現互補序列。

兩個引物之間不應存在互補序列,尤其是避免3 ′端的互補重疊。

引物與非特異擴增區的序列的同源性不要超過70%,引物3′末端連續8個鹼基在待擴增區以外不能有完全互補序列,否則易導致非特異性擴增。

引物3‘端的鹼基,特別是最末及倒數第二個鹼基,應嚴格要求配對,最佳選擇是G和C。

引物的5′端可以修飾。如附加限制酶位點,引入突變位點,用生物素、熒光物質、地高辛標記,加入其它短序列,包括起始密碼子、終止密碼子等。

PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。

模板的取材主要依據PCR的擴增物件,可以是病原體標本如病毒、細菌、真菌等。也可以是病理生理標本如細胞、血液、羊水細胞等。法醫學標本有血斑、精斑、毛髮等。

標本處理的基本要求是除去雜質,並部分純化標本中的核酸。多數樣品需要經過SDS和蛋白酶K處理。難以破碎的細菌,可用溶菌酶加EDTA處理。所得到的粗製DNA,經酚、氯仿抽提純化,再用乙醇沉澱後用作PCR反應模板。

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